HCM UNIVERSITY OF TECHNOLOGY FACULTY OF CHEMICAL ENGINEERING
BÁO CÁO KHOA HỌC ỨNG DỤNG CỦA SẮC KÝ TRONG PHÂN TÍCH THỰC PHẨM
Đề tài: Ứng dụng của sắc ký hiệu năng cao (HPLC) trong phân tích thực phẩm Thực hiện: Nguyễn Văn Tú
- PhD Student (51305919)
TPHCM, 2017
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NỘI DUNG
I. TỔNG QUAN VỀ KỸ THUẬT SẮC KÝ
II. CẤU TẠO CỦA HỆ THỐNG HPLC
III. ỨNG DỤNG HPLC TRONG PHÂN TÍCH THỰC PHẨM
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
I. TỔNG QUAN VỀ KỸ THUẬT SẮC KÝ • Nguyên lý: Quá trình tách của các cấu tử (chất cần phân tích ra khỏi chất nền) dựa trên ái lực khác nhau của mỗi cấu tử đối với pha tĩnh và pha động.
• Hệ thống: Pha tĩnh (stationary phase) và pha động (mobile phase) • Các loại sắc ký phổ biến: Sắc ký khí (Gas chromatography) và sắc ký lỏng (liquid chromatography) Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nguyên tắc của quá trình tách
Tạp phẩm
Trang sức
Điện tử
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nguyên tắc của quá trình tách
Tạp phẩm
Trang sức
Điện tử
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nguyên tắc của quá trình tách
Tạp phẩm
Trang sức
Điện tử
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nguyên tắc của quá trình tách
Tạp phẩm
Trang sức
Điện tử
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nguyên tắc của quá trình tách
sắc ký đồ
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nguyên tắc của quá trình tách • Nguyên lý: Quá trình tách của các cấu tử (chất cần phân tích ra khỏi chất nền) dựa
trên ái lực khác nhau của mỗi cấu tử đối với pha tĩnh và pha động.
• Hệ thống: Pha tĩnh (stationary phase) và pha động (mobile phase) Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nguyên tắc của quá trình tách • Dựa vào mức độ tương tác (ái lực) hoặc kích
thước khác nhau của các chất cần phân tích với các nhóm chức (phân cực hoặc không phân cực,
ion dương hoặc âm...) hoặc với kích thước các khoảng trống (rây phân tử) trong cột nhồi mà các chất có thời gian lưu lại trong cột khác nhau dẫn đến quá trình tách giữa các chất. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
II. CẤU TẠO HỆ THỐNG HPLC • Hệ thống bơm (Pump) • Hệ thống tiêm mẫu (Injection system) • Buồng cột (Column ovent - điều chỉnh nhiệt độ cột) • Cột sắc ký (pha tĩnh – stationary phase) • Pha động (mobile phase – (hỗn hợp) dung môi) • Đầu dò (Detector) • Hệ thống xử lý dữ liệu Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.daykemquynhon.ucoz.com
HPLC System
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Cột sắc ký
• Chứa pha tĩnh • Được nhồi đầy bằng các hạt nhồi
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Cột sắc ký • Kích thước cột – Dài (L): 5 – 30 cm – Đường kính trong (I.D.): 2 – 5 mm – Kích cỡ hạt: 3, 5, 10 µm
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Cột sắc ký • Các loại cột thường dùng trong phân tích: – Cột pha đảo (Reverse phase) – Cột pha thuận (Normal Phase) – Cột trao đổi ion âm (Anion Exchange)
– Cột trao đổi Ion dương (Cation Exchange) – Cột sắc ký rây phân tử (Size Exclusion) – Cột sắc ký ái lực (Affinity) – Cột sắc ký đẳng điện (Mono P) – Cột Ceramic Hydroapatite (CHT) Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Pha tĩnh • Sắc ký lỏng pha đảo (Reversed Phase Liquid Chromatography - RPLC) – Pha tĩnh gồm các phân tử silic dioxyt (silica) có gắn các nhóm chức không phân cực và các nhóm silanol C8
Silica
C18
Silica
Silica
Silanol
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Pha tĩnh • Sắc ký lỏng pha thuận (Normal Phase Liquid Chromatography
- NPLC) – Pha tĩnh gồm các phân tử silic dioxyt (silica) có gắn các nhóm chức phân cực bởi sự thay thế mạch (CH2)nCH3 bằng các gốc phân cực như gốc Cyano, Amino... R Silica
O
(CH2) 3CN
Si R R
Silica
O
Si
(CH2) 3NH2
Amino, NH2
Nơi bồi dưỡng kiến thức R Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Pha động
• Yêu cầu: – Độ tinh khiết cao (ví dụ: nước/đệm với MeOH/ACN) – Không phản ứng với chất phân tích và pha tĩnh – Không có bọt khí – Không có bụi Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Pha động
• Độ phân cực của dung môi ảnh hưởng mạnh đến quá trình sắc ký
ACN/H2O 85:15
MeOH/H2O 85:15
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Pha động
• Một số dung môi sử dụng trong HPLC Độ phân cực Không phân cực
Phân cực
Dung môi Hexan Isooctan Petroleum ether Cyclohexan Carbon tetrahydrochloride Chloroform Dichlorometan Tetrahydrofuran Diethyl ether Ethyl acetate Aceton Acetonitril Isopropanol Methanol Nước Acid acetic
Khả năng tan trong nước
Không Không Không Không Không Không Không Có Không ít Có Có Có Có Có Có
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
pH: Pha động • pH cũng ảnh hưởng đến hiệu quả tách giữa
các chất. Tuy nhiên tùy thuộc vào bản chất của các chất phân tích mà ảnh hưởng của pH có thể làm tăng hoặc giảm khả năng tách của cột. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG CỦA HPLC TRONG PTTP • Florfenicol là 1 loại thuốc kháng khuẩn phổ rộng thay thế cho
kháng sinh Chloramphenicol – là loại kháng sinh chủ yếu dùng để trị bệnh nhiễm trùng huyết đường ruột trên cá tra, ba sa …. • Florfenicol
(2,2-dichloro-N-((1R,2S)-3-fluoro-1-
hydroxy-1-(4-
(methylsulfonyl) phenyl) propan-2-yl) tan tốt trong các dung môi phân cực như: Nước, Chlorofrom, Methanol, Ethyl acetate, Acetone,... Tan ít trong các dung môi không phân cực như: nhexane, Diether ethyl, Benzene, Petroleum ether,.... • Công thức phân tử: C12H14Cl2FNO4S Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH FLOFENICOL TRONG THỦY SẢN TẠI CÁC TRUNG TÂM KIỂM ĐỊNH CHẤT LƯỢNG NÔNG LÂM THỦY SẢN
• Phương pháp này mô tả qui trình phân tích xác định hàm lượng Florphenicol trong các mẫu có
nguồn gốc động vật bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao gọi tắt là HPLC. Giới hạn
phát hiện của phương pháp 50 µg/kg.
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH FLOFENICOL TRONG THỦY SẢN TẠI CÁC TRUNG TÂM KIỂM ĐỊNH CHẤT LƯỢNG NÔNG LÂM THỦY SẢN
• Dư lượng Florphenicol trong mẫu được ly trích bằng ethyl acetate. Dung môi được làm khô bằng
dòng khí nitơ, sau đó hoà tan lại bằng pha động và làm sạch mẫu bằng n – hexan. Hàm lượng chất
phân tích được xác định trên hệ thống HPLC, cột pha đảo C18 và đầu dò UV ở bước sóng 220nm. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH FLOFENICOL TRONG THỦY SẢN TẠI CÁC TRUNG TÂM KIỂM ĐỊNH CHẤT LƯỢNG NÔNG LÂM THỦY SẢN
CHUẨN BỊ MẪU • Lấy các phần ăn được từ những vị trí khác nhau của mẫu. Cắt phần mẫu vừa lấy thành từng miếng nhỏ từ 3-5 cm. Cho phần mẫu vừa cắt (khoảng 100 gam) vào máy xay mẫu, xay đến khi mẫu đồng nhất. Giữ mẫu ở 18C hoặc thấp hơn cho đến khi phân tích. Khi tiến hành phân tích mẫu phải đưa về nhiệt độ phòng. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH FLOFENICOL TRONG THỦY SẢN TẠI CÁC TRUNG TÂM KIỂM ĐỊNH CHẤT LƯỢNG NÔNG LÂM THỦY SẢN
Chuẩn bị mẫu trắng: • Mẫu trắng là mẫu được xác định không chứa florphenicol. Cân 5.00g ± 0.1g mẫu đã được xay nhuyễn vào ống ly tâm 50ml.
Chuẩn bị mẫu kiểm soát 1 g/g: • Cân 5.00g ± 0.1g mẫu trắng đã xay nhuyễn vào ống ly tâm 50ml. Thêm 0.5ml dung dịch chuẩn 10µg/ml (7.5.6.5) vào 5.00g mẫu trắng. Để yên 20 phút trước khi phân
tích.
Chuẩn bị mẫu thử: • Cân 5.00g ± 0.1g mẫu đã được xay nhuyễn vào ống ly tâm 50ml Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH FLOFENICOL TRONG THỦY SẢN TẠI CÁC TRUNG TÂM KIỂM ĐỊNH CHẤT LƯỢNG NÔNG LÂM THỦY SẢN
PP TIẾN HÀNH
• Cho 7ml ethyl acetate (V1) vào các ống ly tâm chứa mẫu trắng ,mẫu kiểm soát và mẫu thử , đậy nắp.
• Lắc khoảng 5 phút, ly tâm 7 phút ở tốc độ 6000 vòng /phút.
• Hút 5 ml (V2) lớp trên cho vào ống ly tâm thủy tinh 15ml • Làm khô dung dịch bằng hệ thống thổi khí nitơ ở nhiệt độ
500C. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH FLOFENICOL TRONG THỦY SẢN TẠI CÁC TRUNG TÂM KIỂM ĐỊNH CHẤT LƯỢNG NÔNG LÂM THỦY SẢN
• Hoà tan phần cặn bằng 5 ml n- hexan, sau đó cho tiếp 1ml (V3) pha động vào, lắc khoảng 10 phút
trên máy lắc , ly tâm 5 phút, tốc độ 4000v/phút • Hút bỏ lớp n – hexan ở trên
• Lấy lớp dưới lọc qua màng lọc mẫu cho vào chai 1.5ml. Dung dịch này dùng để phân tích trên thiết
bị HPLC Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH FLOFENICOL TRONG THỦY SẢN TẠI CÁC TRUNG TÂM KIỂM ĐỊNH CHẤT LƯỢNG NÔNG LÂM THỦY SẢN
ĐIỀU KIỆN PHÂN TÍCH TRÊN HPLC Thời gian chạy: 10 phút Pha động: Acetonitril: đệm Ammonium acetate = 25:75 (v/v) Rửa cột: Sau khi mẫu chạy hoàn tất, rửa cột và hệ thống HPLC với nước cất và acetonitril với lưu lượng 1ml/phút theo tỉ lệ: 35:65 trong 60 phút Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH FLOFENICOL TRONG THỦY SẢN TẠI CÁC TRUNG TÂM KIỂM ĐỊNH CHẤT LƯỢNG NÔNG LÂM THỦY SẢN
• Cân bằng cột sắc ký với pha động 30 phút trước khi tiêm mẫu và chuẩn.
• Thứ tự tiêm: tiêm dãy chuẩn, mẫu trắng, mẫu kiểm soát, sau đó tiêm mẫu thử
• Thể tích tiêm: 100µl. • Tốc độ dòng: 1.0ml/phút
• Bước sóng: 220nm Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.daykemquynhon.ucoz.com
PHÂN TÍCH FLORFENICOL THEO TIÊU CHUẨN QUỐC TẾ
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.daykemquynhon.ucoz.com
PHÂN TÍCH FLORFENICOL THEO TIÊU CHUẨN QUỐC TẾ
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định